2021年央视3·15晚会,报道了河北省青县养殖户在养羊过程中,为了增加出肉率、提高利润,在饲料中偷偷混入瘦肉精的情况。据不完全统计,我国近十年瘦肉精相关事件及通报几十起,几乎每年都能检测出含有“瘦肉精”的肉类及其制品。“瘦肉精”主要是一类叫做肾上腺素受体激动剂的物质,包括克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A等物质,在养殖过程中使用,可以促进动物机制的新陈代谢,降低骨骼肌脂肪,增加瘦肉率并改善肉质色泽,长期食用残留瘦肉精的畜禽肉,药物在体内积蓄到一定程度时,会引起各种不良反应,如心律失常、过敏性丘疹、恶心呕吐等,严重还可能诱发冠心病、高血压,甚至恶性肿瘤。我国已明令禁止在牲畜喂养过程中使用任何瘦肉精。
瘦肉精在毛发中的残留时间很长,停用12周以上仍能够被检测,农业农村部据此制定了利用动物毛发样品检测瘦肉精的技术标准。2022年9月,农业农村部正式颁布公告,发布并开始实施《动物毛发中克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A的测定》检测方法,用于检测动物毛发中瘦肉精残留量。高效液相色谱-串联三重四极杆质谱法测定瘦肉精具有高灵敏性、操作简便、分析自动化、节省时间、重现性好、效率成本比价高、假阳性率低等优点。本应用中心参考以上标准,建立了使用超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱测定动物毛发中“瘦肉精”残留的快速且高灵敏度的分析方法,为食品安全检测提供有效技术支持。
关键词:LC-MS/MS、食品、养殖、动物毛发、瘦肉精、农业农村部公告 第600号
表1 液相色谱串联三重四级杆质谱仪
表2 液相色谱串联三重四级杆质谱仪检测参数
试剂及标准品
试剂:质谱级甲酸(CNW)、色谱级甲醇(Merck)、色谱纯乙腈(Merck);柠檬酸钠、氯化钠、乙酸钠(国药集团);氨水(CNW);十二烷基磺酸钠(阿拉丁)
纯水:18.2 MΩ·cm去离子水(25℃);
标准品:克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A客户提供;内标克仑特罗-D9、莱克多巴胺-D6、沙丁胺醇-D3和苯乙醇胺A-D3均购自阿尔塔。
参考农业农村部公告第600号,具体前处理步骤如下:
样品制备:
选取动物背部毛发,根部剪断,保存备用。取适量毛发加入烧杯中,加入十二烷基磺酸钠溶液,于超声清洗器上超声清洗30 min,水洗净毛发,40 ℃电热干燥箱中烘干,烘干后将其制成粉末。
样品前处理:
称取试样于离心管中,加入混合内标工作溶液,0.1 mol/L盐酸,涡旋混匀,于60 ℃水浴中水解4 h,7000 r/min离心10 min,取上清液备用。固相萃取柱依次用少许甲醇,水预洗,取全部备用液过柱,依次用少许水,甲醇淋洗,抽干,用5%氨水甲醇溶剂洗脱,收集洗脱液,于50 ℃氮吹吹干,用0.1%甲酸乙腈溶液溶解,过0.22 um滤膜,供液相色谱-串联质谱仪测定。
精密称取混合标准工作溶液和混合内标工作溶液适量,用0.1%甲酸乙腈溶解并定量稀释成浓度为0.50 ng/mL的溶液,测试各化合物信噪比(峰-峰)。
表1 各化合物信噪比
图2 各化合物信噪比结果
动物毛发样品经过2.6前处理后测试结果如下所示。
表2 动物毛发样品测试结果
*ND=Not Detected
表3 动物毛发样品测试结果
在试样中分别加入100 ng/mL的混合标准工作液10 uL、25 uL、50 uL,按照3.6前处理方法进行样品处理,测试结果如下所示。沙丁胺醇加标回收率在86.20%-103.11%,莱克多巴胺加标回收率在80.64%-117.28%,克仑特罗加标回收率在81.93%-109.23%,苯乙醇胺A加标回收率在71.83%-98.40%。
表4 各化合物加标回收率测试结果
本文使用LC-MS/MS对动物毛发中克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A含量进行检测,考察方法的线性、灵敏度、稳定性、加标回收率。各化合物线性系数大于0.998;0.5 ng/mL的标准物质溶液信噪比(峰-峰)均大于27;标准溶液在浓度为1 ng/mL、2 ng/mL、5 ng/mL和10 ng/mL时连续6次进样,保留时间RSD不超过0.16%,相对峰面积RSD均小于10%;各化合物在100 ng/mL浓度水平的加标回收率在80%~120%之间。以上结果表明,该方法灵敏度高,精密度良好,满足农业农村部关于动物毛发中克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A含量测定的要求。
附录
设备与耗材方案
一、EXPEC 5210配置详情
二、标准品
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